腺病毒包装

腺病毒包装(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

重组腺病毒（AdV）是人血清5型腺病毒（Ad5），一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。腺病毒缺失了早期表达基因序列E1和E3区。E1是腺病毒复制所必须的，E1的缺失使其不能自身复制，只能依靠包装细胞如293A细胞提供的反式互补进行复制扩增，以此保证腺病毒的安全性。

腺病毒包装特点：

1）几乎可以感染所有类型的细胞。

2）可以获得复制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。

3）病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL，能有效的进行增殖。

注：plaque forming unit/ml，空斑形成单位，感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。

4）腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单。

5）感染细胞时，不整合到染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险，生物安全性高。

简要流程：

1）构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体。

2）采用 PacI 消化纯化的质粒。

3）消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞，收获细胞以制备病毒粗提液。

4）将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒。

5）分装，-80℃保存。

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