慢病毒包装

     慢病毒包装在基因功能的研究过程中，通过使用慢病毒介导的方法能够大大提高基因的转导效率，达到目的基因高效表达的目的。慢病毒主要应用于shRNA、LncRNA、cDNA以及报告基因的研究。

慢病毒包装具有以下特点：

1）适用于难转染的细胞，如干细胞、原代细胞等，可很大程度的提高基因转导效率。

2）慢病毒整合细胞基因组，可进行稳转细胞株的筛选。

3）高纯度的慢病毒可用于活体动物模型。

     慢病毒表达质粒包含了包装、感染、稳定整合宿主细胞基因组所需的遗传信息，包装辅助质粒则提供了所有的转录、包装和重组假病毒所需要的辅助蛋白。为产出高滴度的病毒颗粒，通常将表达质粒和包装质粒共同转染至包装细胞中进行病毒的包装。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外培养液中。通过收集含病毒颗粒的上清，进行浓缩和纯化可获得高纯度和高滴度的慢病毒。

慢病毒包装实验步骤

1、转染前1天，将293T细胞接种于10 CM培养皿中，加入15 mL含10％FBS的DMEM培养液，置37℃，5％CO2培养至约70－80％融合时，进行细胞转染。

2、转染293T细胞

1）将慢病毒表达质粒和包装质粒加入到Opti-MEM中，混匀。

2）将适量的Lipofectamine™ 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中，混匀。

3）5分钟后，将上述两混合液混匀，室温静置20分种后，将混合液加入至培养皿中，前后左右晃动摇匀。置37℃，5％CO2培养箱中培养。

3、6小时后，换含10％FBS的DMEM培养液10mL。

4、转染48小时后，收集病毒上清，500g离心10分钟，0.45 μm滤器过滤。

5、浓缩纯化后，分装，-80℃保存。

     我们提供已测定好滴度，可以直接进行后续实验的慢病毒液、实验报告。质量保证，慢病毒液可用于感染目的细胞。活性滴度5×10⁸ TU/ml。

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