多重荧光免疫组化检测（multiplex fluorescent immunohistochemistry，MF-IHC）是一种应用免疫学基本原理——抗原抗体反应的检测方法。它采用TSA技术，又称之为络胺信号放大技术，通过多重荧光素共价偶联的方法来检测样本中的多种蛋白质。这种方法利用HRP催化后续添加的荧光素，使荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定的结合。最后通过微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还残留在样品上，再进行第二轮的孵育。等到所有的抗体孵育结束以后，荧光素都结合好以后，最后对结果进行检测。由于每一体系中都只有单一抗体孵育，因此无需要担心抗体的交叉反应以及一抗二抗种属匹配的问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
作用：
多重荧光免疫组化检测在医学和生命科学领域中有着广泛的应用。它主要用于同时检测多个生物分子标记物，例如蛋白质、核酸、糖类等，从而实现对细胞和组织的深入分析。例如，在肿瘤领域中可以同时检测肿瘤细胞的多个生物标志物，如PD-L1、TMB、基因表达谱等，以全面、客观地分析患者的肿瘤微环境，帮助临床预测肿瘤对治疗的反应，为患者节省治疗时间和治疗成本。此外，免疫组化检测还能全景展示和统计肿瘤不同区域免疫微环境内各个组分的信息，有利于更加客观的定性、定量评估各种细胞。
总的来说，多重荧光免疫组化检测是一种强有力的工具，可以帮助我们更好地理解疾病的机制，发现新的治疗靶点，提高疾病的诊断率和治疗成功率。
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