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一、组织芯片服务具体步骤
样本选择与收集
根据研究目的选择具有代表性的组织样本,这些样本可以来自不同的患者、疾病阶段或治疗反应组。
对选定的样本进行收集,并确保其完整性和代表性。对于石蜡包埋的组织样本,需要保留足够的蜡块以供后续操作。
样本标记与定位
对收集到的组织样本进行病理学评估和标记,以确定待研究的目标区域。这通常涉及使用显微镜观察并确定具有特定病理特征的区域。
使用标记笔或其他方法在样本上标记出目标区域,以便在后续步骤中准确取芯。
组织芯取样与排列
使用专用的组织芯片点样仪或打孔机从标记好的组织样本中取出微小组织芯(通常直径在0.6-2.0mm之间)。
将取出的组织芯按照预定的设计排列在空白蜡块模上,形成组织芯片阵列。排列时需注意相邻样本之间的距离,以避免切片时的交叉污染。
蜡块融合与切片
将排列好的组织芯与受体蜡块融合成一体,通常在55℃温箱中进行加温处理。此时需严格控制温度和时间,以确保组织芯不易掉片、滑片,同时防止受体蜡块融化移动组织芯位置。
使用切片机对融合后的蜡块进行连续切片,获得组织芯片切片。切片厚度通常为4-8μm,具体厚度可根据实验需求进行调整。
染色与分析
对切片进行染色处理,常用的染色方法包括苏木精-伊红染色(HE染色)、免疫组织化学染色(IHC染色)等。染色后使用显微镜观察切片并进行分析。
根据分析结果对组织芯片进行评估,包括目标蛋白的表达水平、细胞形态变化等,从而得出研究结论。
二、检定过程中需要注意的事项
样本质量与处理
确保收集到的组织样本具有代表性和完整性,避免因样本质量问题导致实验结果偏差。
在处理样本过程中,注意避免污染和损伤,确保样本的病理特征得以保留。
组织芯取样与排列精度
在取样过程中,确保打孔针或取样器的精度和稳定性,避免组织芯的损坏和碎裂。
在排列组织芯时,注意控制相邻样本之间的距离和排列的整齐度,以确保切片的准确性和可比性。
蜡块融合与切片质量
在蜡块融合过程中,严格控制温度和时间条件,确保组织芯与受体蜡块的良好融合。
在切片过程中,注意切片的连续性和厚度均匀性,避免因切片质量不佳而影响实验结果。
染色与分析的标准化
采用标准化的染色方法和操作流程进行切片染色处理,确保染色结果的准确性和可重复性。
在分析过程中注意避免主观因素的影响,采用客观的评价标准对实验结果进行评估。
安全与防护
在组织芯片服务过程中注意实验室安全和个人防护措施的落实,避免有害物质的接触和吸入。
定期对实验室环境进行消毒和清洁处理,保持实验室的整洁和卫生。
组织芯片服务涉及多个精细步骤和注意事项。遵循正确的操作步骤和注意检定过程中的细节问题对于获得准确可靠的实验结果至关重要。在实际应用中应根据具体研究需求选择合适的服务流程和技术方法,并严格按照规范进行操作和分析。